完成单位：山东农业大学
完成人员：周云雷、殷焕顺、艾仕云
获奖情况：2015年山东高等学校优秀科研成果奖—自然科学类三等奖
项目简介：基于甲基结合域蛋白MBD1对5-甲基胞嘧啶的特异结合作用，结合链杂交扩增反应、滚环扩增反应和酶催化信号扩增反应，通过甲基化后激活甲基化灵敏内切酶活性，构建了三种电化学生物传感器，实现对DNA胞嘧啶甲基化的识别，DNA甲基转移酶M. SssI活性的灵敏检测。并以紫杉醇、道诺霉素和5-氟茑嘧啶为模式抑制剂，证明了构建的电化学生物传感器在以DNA甲基转移酶为靶向的抗癌药物筛选中的应用性。此外，我们还利用构建的电化学传感器研究了农药类环境激素和酚类环境激素对DNA甲基转移酶M. SssI活性的影响。研究结果表明，农药毒死蜱和甲基对硫磷对DNA甲基转移酶M. SssI的活性具有抑制作用，而双酚A和壬基酚则对DNA甲基转移酶M. SssI的活性具有促进作用。通过我们的研究，可以为毒死蜱、甲基对硫磷、双酚A和壬基酚的致病机理提供有用的信息，为进一步研究这些环境激素的致病机理打下基础。通过我们的研究，也可以为DNA甲基化的检测和DNA甲基转移酶活性分析提供新的高灵敏的方法，为以DNA甲基转移酶为靶向的抗癌药物研发提供新的技术。